- Docente: Anna Maria Porcelli
- Crediti formativi: 4
- Lingua di insegnamento: Italiano
- Moduli: Anna Maria Porcelli (Modulo 1) Liliana Milani (Modulo 2) Francesca Sparla (Modulo 3) Valeria Cavaliere (Modulo 4)
- Modalità didattica: Convenzionale - Lezioni in presenza (Modulo 1) Convenzionale - Lezioni in presenza (Modulo 2) Convenzionale - Lezioni in presenza (Modulo 3) Convenzionale - Lezioni in presenza (Modulo 4)
- Campus: Bologna
- Corso: Laurea Magistrale in Biologia molecolare e cellulare (cod. 8021)
Conoscenze e abilità da conseguire
Al termine del laboratorio, lo studente acquisirà familiarità con i principali metodi di biochimica, biologia cellulare, biologia molecolare e genetica molecolare, con particolare riguardo alle tecnologie rivolte agli organismi eucariotici (animali e piante).
Contenuti
Modulo 1 - Prof.ssa Anna Maria Porcelli
(1) Separazione di proteine totali mediante la tecnica SDS-PAGE
(2) Trasferimento delle proteine totali su nitrocellulosa e identificazione di specifiche proteine mediante la tecnica del Wester blotting
(3) Analisi densitometrica mediante il software ImageJ e discussione dei dati ottenuti
Modulo 2- Prof.ssa Liliana Milani
(1) Inclusione in agar di materiale biologico fissato
(2) Taglio al vibratomo
(3) Trattamenti sulle sezioni (sodio boroidruro, pronase e permeabilizzazione)
(4) Blocco di siti aspecifici e reazioni anticorpali
(5) Colorazione dei nuclei
(6) Montaggio su vetrini per osservazione al microscopio
Modulo 3 - Prof.ssa Francesca Sparla
(1) Estrazione di DNA plasmidico da cellule di E. coli
(2) Quantificazione spettrofotometrica del DNA estratto
(3) Digestione diagnostica con enzimi di restrizione
(4) Analisi del pattern di digestione su gel di agarosio
(5) Trasformazione di cellule di E. coli
(6) Purificazione mediante cromatografia ad affinità metallica di una proteina ricombinante
(7) Gel elettroforesi SDS-PAGE
(8) determinazione della concentrazione proteica
Modulo 4 - Prof.ssa Valeria Cavaliere
Analisi di profili spaziali e temporali di espressione genica in embrioni di Drosophila mediante saggi immunoistochimici.
(1) Raccolta di embrioni deposti da linee transgeniche di Drosophila.
(2) Trattamenti chimici per ottenere la rimozione degli involucri che circondano l’embrione e il fissaggio dei tessuti.
(3) Incubazione con anticorpo primario e secondario.
(4) Rilevazione dell’anticorpo secondario.
(5) Montaggio su vetrino.
(6) Analisi al microscopio binoculare del profilo di espressione nei vari stadi dell’embriogenesi.
(7) Negli intervalli previsti dalla procedura di immunoistochimica si procederà all’osservazione di individui adulti di Drosophila appartenenti a ceppi di tipo selvatico e a ceppi portatori di specifiche mutazioni genetiche.
Metodi didattici
Durante l'esperienza pratica, gli studenti saranno supervisionati dal docente e dal tutor accademico responsabile. Gli studenti discuteranno con docente e tutor l’esperienza sperimentale in corso allo scopo di chiarire gli approcci analitici, i singoli esperimenti effettuati e le metodologie utilizzate.
Modalità di verifica e valutazione dell'apprendimento
Si ricorda che è richiesta la frequenza ad ognuno dei 4 Moduli del Corso di Laboratorio Multidisciplinare.
Al termine del Corso di Laboratorio Multidisciplinare verrà attribuita l'idoneità concordata tra i docenti dei singoli Moduli.
Orario di ricevimento
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