00062 - BIOCHIMICA APPLICATA

Conoscenze e abilità da conseguire

Al termine del corso lo studente: - conosce gli elementi di base delle principali tecniche biochimiche e le metodologie dell’analisi biochimica; - ha, inoltre, appreso il razionale alla base delle applicazioni di tali tecnologie alla medicina e alla clinica; - è in grado di applicare le metodiche biochimiche alle principali analisi cliniche, di comprendere e interpretare correttamente i risultati anche nell’ottica diagnostica/prognostico; - è in grado di comunicare all’utenza, visto il ruolo delle farmacie del territorio nella effettuazione di semplici analisi biochimico/cliniche, la corretta lettura dei referti.

Contenuti

Modulo didattico di Biochimica Applicata I (24 ore) Prof. Paolo Neyroz

1. Spettroscopia di Assorbimento UV-VIS 

a) Principi fisici dell'assorbimento di una radiazione elettromagnetica

b) Legge di Lambert-Beer

c) Strumentazione e applicazioni 

2.Spettroscopia di Fluorescenza 

a) Principi fisici del fenomeno 

b) Strumentazione e applicazioni

3. Chemiluminescenza 

4. Principi di citofluorimetria

a) Strumentazione e applicazioni

5. Cromatografia Liquida 

a) gel-filtrazione

b) scambio ionico

c) affinità 

6. Elettroforesi 

a) Principi della tecnica

b) SDS-PAGE

c) Isolectrofocusing 

d) gel-elettroforesi 2D 

7. Immunochimica 

a) Struttura degli anticorpi (Ab) e interazione con l'antigene (Ag)

b) Risposta immunitaria primaria e secondaria

c) Produzione Ab policlonali e monoclonali (Mab)

d) Precipitazione del complesso Ab-Ag (zona di equivalenza)

e) Tecniche di immunodiffusione semplice e doppia

f) Immunoelettroforesi

g) ELISA, Immunofluorescenza, DELFIA, RIA

h) Aspetti fisiologici e patologici

8. Tecniche di Biologia Molecolare

a) Enzimi di restrizione e analisi del DNA

b) Tecniche di ibridizzazione e trasferimento su supporti di cellulosa (blotting)

c) Fingerprinting e Polimorfismi

d) PCR, principi e applicazioni

Modulo didattico di Biochimica Applicata II (20 ore) Prof. Concettina Cappadone 

Colture cellulari. Campioni biologici- Soluzioni- tampone e pH: scelta dei tamponi per uso biochimico. Omogenizzazione: scelta delle metodiche e dei media.

Spettrofotometria UV-VIS in Biochimica- Dosaggi colorimetrici.

Tecniche enzimatiche- Richiami di cinetica enzimatica: velocità iniziale, effetto della concentrazione di substrato e di enzima, pH e temperatura- Inibizione enzimatica-

Dosaggio dell'attività enzimatica: metodi continui, discontinui, diretti, indiretti e accoppiati.

 

Esercitazioni: 1.Dosaggio del contenuto proteico in campioni biologici: Metodo di Bradford-2. Dosaggio dell'attività enzimatica, costruzione di una curva di Michaelis-Menten  e calcolo dellaKM e della Vmax- 3. Analisi citofluorimetrica del ciclo cellulare.

Testi/Bibliografia

 Biochimica Applicata, autori Stoppini-Bellotti Editore EdiSES, Napoli 
 

Metodolgia biochimica - Le bioscienze e le biotecnologie in laboratorio

A cura di Keith Wilson e John Walker

Edizioni Raffaello Cortina Editore, Milano costo: 98.13€

Biochimica Clinica

Luigi Spandrio

Edizioni Sorbona, Milano costo: 58€ 

Modalità di verifica e valutazione dell'apprendimento

Per sostenere la prova d'esame è necessaria l'iscrizione tramite bacheca elettronica, nel rispetto
inderogabile delle scadenze previste. Coloro che non riuscissero ad iscriversi entro la data prevista, sono tenuti a comunicare
tempestivamente (e comunque prima della chiusura ufficiale delle liste di iscrizione) il problema al docente tramite posta elettronica. Sarà facoltà
del docente ammetterli a sostenere la prova.
La verifica dell'apprendimento avviene attraverso il solo esame finale, che accerta l'acquisizione delle conoscenze apprese.
La prova finale consiste in un esame orale composto di due parti: Una prima parte consiste in 3 quesiti concernenti il programma teorico del Corso ed una seconda parte che prevede un quesito sulle attività pratiche svolte in laboratorio (Modulo Biochimica Applicata II).
La valutazione sarà basata sulle risposte date ad ogni quesito e alla capacità dimostrata di aver appreso le nozioni fondamentali al raggiungimento degli obiettivi didattici. La definizione di quelle conoscenze e la loro padronanza critica concorrono al voto finale in trentesimi.

Strumenti a supporto della didattica

Diapositive powerpoint

Orario di ricevimento

Consulta il sito web di Paolo Neyroz

Consulta il sito web di Concettina Cappadone